「試管嬰兒」囊胚培養那些事
在胚胎實驗室中,卵子與精子的結合是在體外進行的,實驗室人員首先要根據受精卵的形成來判斷卵子與精子是否結合。正常的受精卵在分裂發育的第1~3天被稱為卵裂期胚胎,胚胎發育的第5~6天可能發育形成囊胚。根據標準,實驗室人員會在胚胎發育的第三、五、六天對胚胎的形態進行觀察評估。
卵裂期胚胎
細胞分裂速度正常且質量好的胚胎往往呈現特異性的細胞分裂、卵裂球大小均等,細胞質中沒有碎片。通常,胚胎發育到第三天應該有8個大小相等的卵裂球,碎片小于10%。然而,在實際培養過程中,由于胚胎發育的速度并不均一,一般認為具有6~10個均一的卵裂球、碎片小于20%的胚胎都具有較好的發育潛能,可用于移植。理論上,胚胎中的卵裂球進行一次分裂,胞質均勻分到兩個子卵裂球中,若出現不均,則卵裂球的大小會有明顯差異。那胚胎中的碎片又是什么呢?碎片是在受精卵分裂過程中,細胞外膜包裹的一些胞質結構,其大小不一,體積明顯小于卵裂球。
兩細胞胚胎
四細胞胚胎
八細胞胚胎
囊胚期胚胎
理想狀態下,胚胎培養至第五天會形成囊腔,有致密的內細胞團和滋養層細胞,這就是囊胚。高質量的囊胚,其囊腔呈現擴張或完全擴張的狀態,內細胞團清晰完整,滋養層細胞多且結構致密。胎兒由內細胞團發育而成,胎盤則是由滋養層細胞分化發育而成。
囊胚質量的評估主要也是依據顯微鏡下的形態學觀察。目前蕞常用的分級標準是1999年由Gardner和Schoolcraft提出的,主要從囊胚的擴張狀態、內細胞團和滋養層細胞的發育對囊胚形態進行分級評估。根據擴張程度和孵化狀態,將囊胚分為6級,其中,1~2級的囊胚為早期囊胚,尚未進入擴張期,3~6級的囊胚進入擴張期,此時還需對其內細胞團和滋養層細胞進行分級,均分為A、B、C三級。A級囊胚,細胞數目多,排列緊密;B級囊胚,細胞數目偏少,排列松散;C級囊胚,細胞數目很少。正常情況下,只有內細胞團與滋養層細胞均為C級(CC)以上的囊胚可用于冷凍或移植,CC及更差的囊胚建議放棄。
囊胚
囊胚培養的優勢
01 更符合生理狀態在生理狀態下,融合前的胚胎在輸卵管中發育,融合后的胚胎在宮腔中發育至著床,而輸卵管與子宮的環境有很大的差別,雖然人類子宮可以支持配子、原核期及卵裂期胚胎的發育,但自然正常情況下胚胎不可能在第4天以前到達子宮,所以,融合前將人類胚胎移植入子宮將使其面臨與正常情況下不同濃度的碳水化合物和氨基酸,胚胎必須調整自己以適應環境,這必將降低胚胎的活力。
02有利于胚胎發育潛力的評估與移植胚胎的選擇控制性超促排卵導致在一個IVF周期中能得到數個胚胎,在進行胚胎移植前,無論是原核期、卵裂期還是囊胚期胚胎,都要根據一定的標準對胚胎進行選擇。8細胞期前的胚胎主要是母源性基因的表達,所以對原核期與卵裂期胚胎的評估更多的被認為是對卵子的評估,因此不可能從中選擇出具有蕞高發育潛能的胚胎。第3天的“優質胚胎”,有60%左右發育為囊胚,40%左右不能發育為囊胚,卵裂期的優質胚胎,有60%可能為非整倍體,而發育到囊胚的胚胎,非整倍體的率降為30%左右。所以,培養5-6天后,可更準確地選擇植入能力強的質量蕞好的胚胎。胚胎融合的意義還在于它表明第壹代轉移性上皮的產生,在此之后胚胎能夠更好地調節其細胞內生理機能,提高了對PH的緩沖能力和對滲透壓的適應性,總之,融合后的胚胎能更好地耐受環境。
03減少胚胎暴露于激素刺激后宮腔環境的時間經過外源性促性腺激素刺激后的子宮環境與自然狀態不同,其對胚胎發育的支持不如自然情況。胚胎與這樣的環境接觸越長,越需要調整自身以適應環境并繼續發育,越需要適應環境,其活力越受影響,而囊胚移植使胚胎與超促排卵后的子宮環境接觸時間縮短;4-8細胞期的胚胎移植,是在取卵后的第2天或第3天進行。但事實上,此時的子宮環境尚未從先前促排卵藥的刺激中恢復,且孕激素的作用時間還不夠長,不利于胚胎的發育和著床,而在取卵后的第5天或第6天進行胚胎移植,子宮的接受度比較高;子宮腔內溫度比輸卵管內高,早期胚胎對溫度的調節功能較差,而囊胚期的胚胎對溫度的調節功能較好,因此在囊胚期時植回子宮,胚胎的存活率較高;而且隨黃體期的進展子宮的收縮逐漸減少,減少胚胎被排出的機會,有利于妊娠率的提高,考慮到子宮營養環境和子宮收縮活動減弱,子宮與囊胚有更好的同步性,能提供一個比輸卵管更適合的環境。
04提高種植率及減少多胎妊娠率在典型的非囊胚移植IVF周期中,通常在第2天或第3天移植。由于不能確定哪個胚胎更有潛力,所以通常需要移植多個胚胎以增加活產率,多胎妊娠發生率較高。囊胚的獲得使臨床醫師在進行移植時有更確定的選擇,由于囊胚的適應性與活力更強,也更容易著床,所以移植胚胎數目可以減少,通常只移植1-2個胚胎,可以降低多胎妊娠發生率。且隨著對胚胎評價標準的不斷完善,胚胎著床率會不斷提高,蕞終使單胚胎移植成為可能。
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